Sterilizasyonlar

DNr. 1.15

Sterilizasyonun maksadı:

Bulaşmaya neden olacak bütün mikroorganizmaların öldürülmesidir. Bu işlemde ortamın, kullanılan aletlerin ve materyallerin sterilizasyonu gereklidir. Bu işlemler sırasında plastik eldiven giymek kirlenme şansını azaltır.

Bitkilerin sterilizasyonu

% 70 lik etanol ile sterilizasyon

Bazı durumlarda izole edilen bitki parçasının %70 lik etanol içerisine 30 sn. süre ile daldırılıp, sonra diğer sterilant madde ile sterilize edilmesi yaralı olmaktadır.

%70 lik etanol hazırlanması:

100 ml. mezuraya % 98`lik etanol (Temizlik alkolü)' nden 70 ml. ilave edilip su seviyesi 100 ml.`ye tamamlanıp karıştırıldıktan sonra kullanıma hazırdır.

Sodyum hipoklorit ile sterilizasyon

% 5`lik ticari çamaşır suyundan ‰ 20`lük sterilasyon banyosu hazırlanır. Bu banyoda sürgünler ve çalışmalarda kullanılacak bütün takımlar kısa süre batırılarak sterilize edilip akarsu ile yıkanır.

‰ 20`luk sterilasyon banyosunun hazırlanışı:

100 ml. mezuraya % 5`lik çamaşır suyundan (Sodyum hipoklorit) 20 ml. ilave edilip su seviyesi 100 ml. ye tamamlanıp karıştırıldıktan sonra kullanıma hazırdır.

Tohumların dezenfekte edilmesi

Potasyum permanganat (PERMA SOL) üretici adı ile tanınan bu sterilasyon malzemesi 20 tablet bir kutuda olup bir tablet 250 mg. ağırlığındadır. Mantar ve bakteriallerin yok edilmesinde etkilidir. Bu sebeple zehirlidir. Eldivenle kullanılmalıdır. Kullanımında rengi koyu mavidir.

Hazırlanışı ve kullanımı; 1/4000 lik çözelti elde etmek için 1 litre suda 1 tablet) veya bir litre suda 1 gr. potasyum permanganat eritilir. Bu çalışmada cam veya plastik kap kullanılmalıdır. Tohumlar bu solusyonda 2 dakika bekletildikten sonra sıcak akar su ile yıkanır.  "Orchid Seeds"

Üretici firma; 
MÜNİR ŞAHİN İLAÇ SANAYİ VE TİCARET A.Ş

Yunus mah.Sanayi cad. N0 22 Kartal/İstanbul

Sterilizasyonların sonu

-  Çelikler akarsuda yıkanır.

-  Çelikler sterilasyon banyosuna batırılmasından sonra sterilize lastik eldivenlerle tutularak akarsu ile durulanır.

Laboratuvar çalışmalarında sterilizasyonlar

Tüm invitro tekniği steril koşullar altında yürütülmelidir. Bunun için de üretim amacıyla alınanların kullanmadan önce sterilize edilme zorunluluğu vardır. Ancak sterilizasyon sırasında bitki hücrelerinin ölmemesine özen gösterilmelidir.

Özellikle örneklerin kesim yerleri sterilizasyon maddesine çok hassas olduğundan sterilizasyondan sonra tekrar sterile ortamda kesim yapılmalıdır.

Çalışma ortamının sterilasyonu :

-    Kabin içi alkolle (%70’lik etanol) ile spreylenir ve steril bir bez ile silinir.

-    Bütün işlemler steril hale getirilmiş kabin içinde yapılır.

Kullanılan aletlerin sterilasyonu :

Basınçlı pişirici içine (bu üstü kapanan bir tencere olabilir) önce 1/5 oranında su, üzerine ayaklı metal bir sehpa konulur, sterilize edilecek metal takımlar alüminyum folyoya sarılıp, kavanozlar kapakları gevşek olarak kapatılarak bu sehpa üzerine yerleştirilip ısıtmaya başlanır. Isının 100 dereceye (Kaynama noktasına)`ulaşmasından sonra 15 dakika bekletilerek içindekilerin sterilizasyonu sağlanıp soğuması beklenir.

Folyoya sarılı sterilize edilen takımlar kullanılacağı zaman açılmak üzere ve kavanozlar kabin içine yerleştirilir.

Bitki materyallerinin sterilasyonu :

Bitki organ veya dokusundan alınan (explantların) önce, bitki yüzeyindeki mikroplarının temizlenmesi gerekmektedir.

-    Bitki parçalarının sterilizasyonu için gereken 121 C°`de otoklavdır.

-    Bazı durumlarda izole edilen bitki parçasının %70 lik etanol içerisine 30 sn. süre ile daldırılıp, sonra diğer sterilant madde ile sterilize edilmesi yaralı olmaktadır.

-    Explantların sterilizasyonunda, kalsiyum hipoklorit veya sodyum hipoklorit solüsyonları, hidrojen peroksit, gümüş nitrat, cıva klorür gibi maddeler sterilant olarak kullanılmaktadır.

Steril toprak karışımı. 30 dakika 250 derece bir tavada pişirilir. Öneriler 250

KAYNAK
T.C.M.E.B. Mesleki Eğitim ve öğretim GüçlendirmE Projesi MEGEP)  BAHÇECİLİK / 
Temel bitki yetiştiriciliği / TOPRAK